肛门周围癌确诊需进行肛门指检、影像学检查和组织病理学检查三类核心检查。
肛门指检是初步筛查的重要手段，医生通过手指触诊可发现肛门及直肠下端5-7厘米范围内的异常肿块，同时评估肿瘤位置、大小及活动度。约60%的肛门癌可通过指检发现异常。
影像学检查主要包括直肠腔内超声、盆腔MRI和PET-CT。直肠腔内超声能清晰显示肿瘤浸润深度及周围淋巴结转移情况，准确率达85%；盆腔MRI对评估肿瘤与周边器官的关系具有优势；PET-CT则用于全身转移灶筛查，对远处转移的诊断特异性超过90%。
组织病理学检查是确诊的金标准，通过肛门镜引导下活检获取病变组织。常见活检方式包括钳取活检和穿刺活检，需至少取3-5个不同位点的组织样本。病理报告需明确鳞状细胞癌、基底细胞癌等具体分型，同时检测HPV感染状态及PD-L1表达水平。
少数情况下需补充肛门压力测定评估括约肌功能，或进行结肠镜检查排除结直肠多发肿瘤。所有检查结果需由肿瘤科、肛肠外科、放射科等多学科团队联合评估。
