青霉素过敏的确诊需通过专业医学检测。常见方法包括皮肤点刺试验、皮内试验和血清特异性IgE检测，确诊流程需在具备急救条件的医疗机构由过敏专科医生完成。
皮肤点刺试验是首选筛查方式，将稀释后的青霉素抗原滴于前臂皮肤，用点刺针轻刺表皮。15-20分钟后观察局部风团和红晕反应，阳性结果提示存在IgE介导的速发型过敏反应。该方法灵敏度约70%，但存在假阴性可能。
皮内试验采用更稀释的抗原溶液进行真皮层注射，适用于皮肤点刺试验阴性但临床高度怀疑过敏者。该检测可能诱发严重过敏反应，必须配备肾上腺素等急救药物。阳性表现为注射部位出现直径超过对照组的丘疹伴红晕。
血清特异性IgE检测通过抽血化验青霉素代谢产物的抗体水平，适用于皮肤试验禁忌者如严重皮炎患者。但该方法存在约20%假阴性率，阴性结果不能完全排除过敏可能。
药物激发试验是确诊的金标准，在严密监护下分剂量递增给药，观察是否出现过敏症状。由于风险较高，仅适用于其他检查结果矛盾且必须使用青霉素的情况。任何阳性反应都需永久记录为过敏史。
青霉素过敏存在交叉反应现象，对一种β-内酰胺类抗生素过敏者可能对其他同类药物产生反应。确诊后应避免使用相关药物，并在病历和过敏警示手环上明确标注。部分患者随时间推移可能产生耐受，需通过专业检测重新评估。
