亚叶酸钙片主要用于治疗甲氨蝶呤过量或中毒、巨幼红细胞性贫血，也可用于化疗辅助治疗。亚叶酸钙是叶酸的活性形式，能绕过二氢叶酸还原酶直接参与DNA合成，主要用于解救叶酸拮抗剂毒性、改善贫血及增强化疗效果。
亚叶酸钙片可中和甲氨蝶呤的毒性作用。甲氨蝶呤抑制二氢叶酸还原酶导致体内叶酸代谢障碍，引发黏膜溃疡、骨髓抑制等不良反应。亚叶酸钙作为补救剂可减轻口腔溃疡、腹泻等症状，常用剂型包括亚叶酸钙片、亚叶酸钙注射液。使用时需严格监测血清甲氨蝶呤浓度。
该药能纠正叶酸缺乏导致的贫血。当维生素B12缺乏合并叶酸缺乏时，需先排除恶性贫血才能使用。亚叶酸钙片可改善大细胞性贫血引发的乏力、舌炎等症状，常与维生素B12联用，如亚叶酸钙片联合甲钴胺片治疗。
与氟尿嘧啶联用可增强抗肿瘤效果。亚叶酸钙通过稳定氟尿嘧啶与胸苷酸合成酶的结合，提高化疗敏感性。用于结直肠癌方案如FOLFOX时，需配合奥沙利铂注射液、氟尿嘧啶注射液使用。可能出现中性粒细胞减少等不良反应。
作为放疗增敏剂用于部分头颈癌治疗。亚叶酸钙可调节细胞内叶酸代谢增强放疗效果，常与顺铂注射液、西妥昔单抗注射液联合使用。需注意口腔黏膜炎等放射增敏反应。
包括牛皮癣的辅助治疗及骨髓异常增生综合征。用于银屑病患者时需评估肝肾功能，剂型可选亚叶酸钙颗粒。治疗MDS时多与地拉罗司分散片等联用改善血象。
使用亚叶酸钙片期间应定期监测血常规和肝肾功能，化疗患者需控制高蛋白饮食减少肝肾负担。避免与苯妥英钠片等抗癫痫药同服，哺乳期妇女禁用。出现严重过敏反应或持续性腹泻需立即停药就医，长期服用者建议补充维生素B12预防神经病变。
