青霉素不能与氨基糖苷类抗生素、大环内酯类抗生素、四环素类抗生素、氯霉素、磺胺类药物等合用。青霉素属于β-内酰胺类抗生素，与某些药物联用可能产生拮抗作用或增加不良反应风险，需严格遵医嘱使用。
青霉素与氨基糖苷类抗生素如链霉素、庆大霉素等合用可能导致药效降低，两者混合注射还可能产生沉淀。青霉素的β-内酰胺环易被氨基糖苷类破坏，临床需分开给药并间隔一定时间。青霉素与大环内酯类抗生素如红霉素、阿奇霉素联用会产生药理拮抗，大环内酯类抑制细菌蛋白质合成，可能干扰青霉素的杀菌作用。四环素类抗生素如多西环素、米诺环素与青霉素联用可能影响青霉素对细菌细胞壁的破坏效果，降低治疗效果。
青霉素与氯霉素合用可能减弱其抗菌活性，氯霉素作为抑菌剂会阻碍细菌繁殖，使青霉素难以发挥杀菌作用。磺胺类药物如复方新诺明与青霉素联用可能增加结晶尿风险，两者竞争肾脏排泄通道。部分解热镇痛药如阿司匹林可能通过竞争血浆蛋白结合位点影响青霉素血药浓度。丙磺舒虽可延缓青霉素排泄，但需在医生指导下调整剂量，避免蓄积中毒。
使用青霉素期间应避免饮酒或含酒精饮料，防止双硫仑样反应。服药期间需观察是否出现皮疹、呼吸困难等过敏症状，过敏体质者用药前必须进行皮试。建议用药期间保持充足水分摄入，定期监测肝肾功能，避免与含重金属离子的药物或保健品同服。若需联合用药，应间隔两小时以上并咨询切勿自行调整用药方案。
