单纯疱疹病毒HSV感染可通过血清学检测、病毒培养、核酸检测和抗原检测等方式确诊。临床诊断需结合典型症状和实验室检查结果综合判断。
血清学检测通过检测血液中HSV特异性抗体IgM和IgG判断感染状态。IgM抗体阳性提示近期感染，IgG抗体阳性则表明既往感染或潜伏感染。该方法适用于无症状感染者筛查和流行病学调查，但无法区分HSV-1和HSV-2型别。
病毒培养是传统金标准，采集水疱液或溃疡面分泌物接种细胞培养。阳性结果可确诊活动性感染，但检测周期需3-5天，且对样本运输和保存条件要求较高，阳性率随皮损愈合逐渐降低。
核酸检测采用聚合酶链反应PCR技术，能快速检测临床样本中的病毒DNA。该方法灵敏度达90%以上，可在症状出现24小时内检出病毒，适用于早期诊断和中枢神经系统感染检测。脑脊液PCR是疱疹性脑炎的确诊依据。
抗原检测通过免疫荧光法或酶联免疫法直接检测病毒蛋白，30分钟即可获得结果。适用于皮损样本的快速筛查，但灵敏度低于PCR检测。采样时需刮取溃疡基底部细胞以提高检出率。
典型症状如群集性小水疱伴灼痛感可提供临床诊断线索。口唇疱疹多由HSV-1引起，生殖器疱疹多与HSV-2相关。复发患者出现前驱症状时即可进行检测，无需等待皮损出现。免疫功能低下者出现不典型皮损时应尽早完善实验室检查。
